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      細胞凋亡試劑盒的使用,需要注意什么?

      發表時間:2022-06-24  |  點擊率:67
        細胞凋亡與細胞壞死不同,細胞凋亡是為維持環境穩定,為更好的適應勝春環境而主動爭取的一種死亡過程,它涉及一系列基因的激活、表達以及調控等作用,是一種字體損傷的現象。
        細胞凋亡是細胞的基本特征之一,在機體的胚胎發育、組織修復、內環境的穩定等方面都起到十分重要的作用。Annexin V是一種分子量為35.8 KD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白,能與細胞凋亡過程中翻轉到膜外的磷脂酰絲氨酸高親和力特異結合。FITC-Annexin V結合到凋亡細胞后,在藍色光的激發下,發出綠色熒光,區分出凋亡細胞與正常細胞。碘化丙啶是一種核酸染料,它不能穿透完整細胞膜,但對凋亡晚期細胞和死細胞的破損細胞膜能夠穿透,并使細胞核紅染。將FITC-Annexin V與PI匹配使用,可以將凋亡早期的細胞和晚期的細胞區分開來。
        使用細胞凋亡試劑盒的注意事項
        1.旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內壁上的液體甩至管底,避免開蓋時液體灑落。
        2.Annexin V-FITC和Propidium iodide是光敏物質,在保存與操作時請注意避光。
        3.Propidium iodide(PI)能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用。
        4.在細胞洗滌的最后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留影響實驗結果。
        5.PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首先進行Annexin V-FITC染色,上機前5分鐘再加入PI染色。
        6.整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作。
        7.反應完畢后請盡快檢測,因為細胞凋亡是一個動態的過程,反應1小時后熒光強度就開始衰變。
        8.細胞凋亡試劑盒成功的檢測凋亡受以下幾種因素的影響,如細胞類型、細胞膜上PS的密度、發生凋亡時PS翻轉的比例、誘導細胞凋亡的方法、所用試劑、誘導凋亡的時間等,把這些影響因素進行優化對實驗成功是非常必要的。
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